随后通过桑格测序进

[edless]

养基选择克隆，并进一步验证菌落PCR和桑格测序。 为了转化，酵母细胞在 YPD 培养基（1% 酵母提取物 (Oxoid)、2% 蛋白胨 (Oxoid) 和 2% 葡萄糖 (Sigma)）中于 30 °C 下生长，直至 OD = 0.6，然后用质粒或 PCR 转化采用标准 Li-Ac 方法生产的产品。将转化的酵母细胞铺板于合成的脱落固体培养基(TaKaRa)中。大约2天后，挑取单个酵母菌落，行确认。用于基于光的图案化的酵母细胞在合成的脱落

固体培养基（覆盖光掩模；光掩模是通过使用打印机将特定图亚洲手机号码列表像打印到透明薄膜上创建的）上用蓝光在26°C下生长2天。如果没有特别提及，酵母细胞在30°C下生长。 除非另有说明，为了检测光调节蛋白的稳定性，将细胞培养在48孔板中，并用LED灯发出的15 μmol m -2 s -1蓝光（460 nm峰值）照射或在黑暗中保持表征前 15 小时。

使用中性密度滤光片来调节光强度。用光度计（Sanwa，LX-2）测量光强度。对于暗操作，使用红色 (620–630 nm) LED 灯。 克隆 除非另有说明，DNA 构建均使用 Hieff Clone 一步克隆试剂盒 (YEASEN) 进行。为了在酵母中表达，pGADT7 AD 载体 (Clontech) 被用作构建表达不同融合体的质粒的基本骨架。通过反向PCR从原始pGADT7 AD载体中去除SV40-NLS、GAL4激活结构域和HA标签以获得pGADH。